Q：问题

A,：可能的原因和建议的解决方案

低回收

² 确保琼脂糖完全溶解：

样品中可能有微小未溶解的琼脂糖球，会堵塞结合柱和将一些低盐，杂质带入最终的洗脱好的DNA中，并且降低柱的结合率。

² 凝胶溶解在60°C以上的温度下：

如果在较高的温度下溶解，DNA可能会变性，影响DNA回收率。为最佳结果，凝胶切片在37-55°C之间溶解。

² 制备不当/储存不当的DNA洗涤液：

确保在DNA洗涤缓冲液中加入了乙醇。盖住瓶子紧密防止随时间蒸发。

² 加入DNA洗脱缓冲液：

将洗脱缓冲液直接添加到纯化柱基质中，而不是添加到纯化柱的壁上。洗脱缓冲器对于≥10kb的DNA，需要与基质接触至少1分钟。

² 不完全的洗脱：

DNA的洗脱依赖于pH值、温度和时间。对于大基因组DNA(≥50kb)，将加热的洗脱缓冲液（60-70°C）应用于纯化柱上，并在洗脱前孵育2分钟。可进行连续洗脱以提升最终核酸量。这适用于DNA片段长度≥10kb。

低A260/A230比率

² 纯化柱尖被污染：

用胶回收试剂盒纯化后的DNA，琼脂糖凝胶中出现多个条带。

² DNA Loading Dye的酸化作用：

大多数Loading Dye不含EDTA，由于微生物生长会使其酸化（pH≤4）。这种低pH值足以导致DNA降解。因此，如果是用水洗脱DNA，推荐使用含有1mM EDTA的6X Loading Dye。