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表观遗传学

JSR545-甲基化检测样本前处理试剂盒(磁珠法)

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JSR545 4x96次/盒 4500.00元
JSR545 8x96次/盒 7875.00元
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01/产品亮点及其他规格


直接从血液、组织或细胞中对 DNA 进行高通量、完全的亚硫酸氢盐转化

兼容小样本输入-少至 10 个细胞或 50 pg DNA;非常适合 FFPE 和 LCM 衍生样本

高通量(96 孔磁珠法)、自动脱硫和 回收亚硫酸氢盐处理过的 DNA。


甲基化检测样本前处理试剂盒

货号,规格之间的区别


传统版

经典版

样品直接转化版

快速版

科研货号(单柱法)

JSR501

JSR505

JSR520

JSR530

科研货号96孔柱法)

JSR522 ;JSR523

JSR507 ;JSR508

JSR522 ;JSR523

JSR532 ;JSR533

科研货号(磁珠法)

JSR540 ;JSR541

JSR542 ;JSR543

JSR544 ;JSR545

JSR546 ;JSR547

医疗货号(单柱法)

JSM501

JSM505

JSM520

JSM530

性能差异

转化率

99%

99%

99.5%

99.5%

处理时间

12-16h

2.5h

3.5h

1h

投入量

500pg-2ug DNA

500pg-2ug DNA

DNA (≥ 50 pg), cells (≥ 10) blood, tissue, FFPE

100pg-2ug DNA


02/DNA 甲基化简介


胞嘧啶甲基化是一种自然发生的碱基修饰,在原核生物和真核生物中,包括通过甲基转移酶到胞嘧啶嘧啶环的第五碳位(1)。

在原核生物中,DNA甲基化提供了一种保护宿主DNA不被旨在消除外来DNA的限制性内切酶消化的方法。高等真核生物的DNA甲基化在基因表达的调控/控制中发挥作用(2)。

大多数哺乳动物的DNA甲基化发生在5-CpG-3二核苷酸,尽管其他模式存在约80%的5-CpG-3二核苷酸在哺乳动物基因组被发现甲基化,和20%的大多数仍未甲基化在启动子或基因的第一个外显子。已经证明,异常的DNA甲基化在癌症中是一种普遍存在的现象,可能是肿瘤发生过程中发生的最早的变化之一(3)。

DNA甲基化也被证明在基因印迹、胚胎发育、x染色体基因沉默和细胞周期调控中起着核心作用。有效和准确地检测和量化DNA甲基化的能力已经成为癌症、基因表达、遗传疾病和生物学中许多其他重要方面的研究至关重要。迄今为止,已经开发了许多方法来检测/量化DNA甲基化,包括:高性能毛细管电泳(4)

和甲基化敏感的任意引物PCR (5)。

然而,目前最常用的技术仍然依赖于亚硫酸氢盐转化(6)。

用亚硫酸氢盐处理DNA可将非甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶,甲基化胞嘧啶保持不变。一旦转化,DNA的甲基化谱可以使用所需的下游应用来确定。对于单位点分析,感兴趣的区域通常在亚硫酸氢盐转化(即亚硫酸氢盐PCR)后进行扩增,然后测序或处理进行焦磷酸测序®.甲基化检测的最新进展也允许使用基于阵列的方法、还原代表性亚硫酸氢盐测序(RRBS)和全基因组甲基化测序(7)

参考文献

1.Adams RL. Bioessays. 1995; 17(2): 139-145.

2.Costello JF, Plass CJ. Med. Genet. 2001; 38(5): 285-303.

3.Stirzaker C. Cancer Res. 1997; 57(11): 2229-2237.

4.Fraga MF, et al. Electrophoresis. 2000; 21(14): 2990-2994.

5.Gonzalgo ML. Cancer Res. 1997; 57(4): 594-599.

6.Frommer M. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992; 89(5): 1827-1831.

7.Rakyan VK, et al. Nat. Rev. 2011, 12(8): 529-541.





FAQ常见问题及解决方法


Q,问题

A, 可能的原因和建议的解决方案

DNA在转化之前是否应该溶解在TE、水或其他缓冲液中呢?

水、TE或改性TE缓冲液可用于溶解DNA,且不干扰转化过程。

推荐哪种Taq聚合酶(s)用于PCR转化DNA的扩增?

我们推荐一种“热启动”DNA聚合酶(例如,ZymoTaq™DNA聚合酶)。。

为什么甲基化检测样本前处理试剂盒有两个不同的货号?

这两种不同的目录号用于区分试剂盒中包含的装订板。

深孔和浅孔结合板可容纳大多数转子和微孔板载体。下面是两个装订板的比较。


名称

2号柱96孔板

1号柱子96板

规格

板高度

19mm(0.75英寸)

35mm(1.38英寸)

绑定板/收集板组件

43mm(1.69英寸)

60mm(2.36英寸)

核酸载量/洗脱量

5 µg/30 µl

5 µg/15 µl

成品货号

TD5022

TD5023

亚硫酸氢盐转化后DNA的特征

碎片化 •基因组DNA在50 〜 1500 bp范围大小

•片段化的DNA投入(FFPE、cfDNA、消化的DNA)回收率较低

类似于RNA •包含尿嘧啶(U)

•单链

影响转化效率的因素有哪些?

1.CT反应液体应在反应前新鲜准备  •不应长时间暴露在光/空气中

2.使用的DNA过多•不超过2ug

3.植物或其他样品应使用内标

4.环状DNA(质粒、mtDNA) •在转换之前必须线性化


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