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突破PCR实验瓶颈,提升实验效率:一步解决PCR抑制物去除发布日期:2024-09-11   浏览次数63

前言:在分子生物学的研究和应用中,PCR(聚合酶链式反应)技术几乎无处不在。然而,很多研究者都会遇到一个共同的难题——PCR抑制物的存在。这些抑制物来自于提取的DNA和RNA样品中,如腐殖酸、黄腐酸、单宁酸和黑色素等多酚类物质,极大地影响了PCR扩增效率,甚至可能导致实验失败。

一、实验原理:让PCR抑制物无处遁形
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PCR抑制物去除剂通过一种独特的清洗技术,能够在一步操作中有效去除样品中的PCR抑制物。这种技术通过选择性结合和分离的方法,去除样品中的多酚类物质及其他潜在的抑制物,从而确保在后续PCR或NGS(下一代测序)实验中获得清晰、准确的扩增结果。

问题一:想要进行PCR或NGS(下一代测序)实验的话,想要获得纯净核酸会遇到哪些提取问题?

1. 抑制剂的存在:样本中可能含有各种抑制剂,如血液中的血红素、土壤中的腐殖质、食品中的脂类等。这些抑制剂可能干扰PCR扩增或NGS文库构建,导致反应效率下降或结果不准确。因此,去除这些抑制剂至关重要。
2. 核酸降解:核酸容易受到酶(如DNase、RNase)或环境因素(如pH、温度)的影响而降解。尤其是RNA,由于其单链结构,比DNA更易降解。样本保存不当或提取过程中未能有效抑制降解酶,都可能导致核酸质量不佳。
3. 低回收率:在核酸提取过程中,特别是从复杂样本如血液、组织或环境样本中提取时,可能会遇到回收率低的问题。这会影响下游PCR或NGS实验中的核酸浓度和量的需求,从而影响实验的灵敏度和准确性。
4. 共提物干扰:在某些样本类型中,核酸提取时可能会共提取出蛋白质、多糖、脂类等杂质,这些物质会干扰PCR或NGS反应,甚至可能抑制酶活性,从而影响实验结果。
5. 样本多样性带来的挑战:不同类型的样本,如血液、组织、细胞、土壤等,核酸提取的难度和方法需求各异。一些样本可能含有较少的可用DNA或RNA,这需要优化提取方法,确保能得到足够且高质量的核酸用于下游分析。

问题二:在后续PCR或NGS(下一代测序)实验中如何获得清晰、准确的扩增结果?

使用ZYMO一步法PCR抑制物去除试剂盒
1. 快速简便的工作流程:仅需一步操作即可完成抑制物的去除,整个流程简便高效,节省了宝贵的实验时间。无论是常规实验还是高通量检测,这款去除剂都能助您轻松应对。 2. 强大的抑制剂去除效果:我们的PCR抑制物去除剂具有卓越的抑制物去除能力,能够有效清除DNA和RNA样品中的腐殖酸、黄腐酸、单宁酸和黑色素等物质。这一特性保证了PCR和NGS实验的高精度,减少了因抑制物导致的实验误差。 3. 高DNA和RNA收率:在去除抑制物的同时,PCR抑制物去除剂还确保了高达80%以上的DNA和RNA回收率。这个优势意味着您不仅能获得高质量的核酸样品,还能最大限度地保留样品中的遗传信息,为后续的实验提供可靠的保障。
4.优质的样本保存:Zymo的样本保存可以最大程度上的保证样本的稳定运输。

关于:OneStep™ PCR Inhibitor Removal Kit(一步法PCR抑制物去除试剂盒(D6031))产品细节
1、水体、植物、土壤等富含抑制剂的样本处理前与处理后,荧光定量PCR结果存在显著差异。
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使用Zymo Research 一步法PCR抑制物去除试剂盒(OneStep™Kit)仅需简单的处理,即可得到无抑制物适合任何下游应用的纯净核酸。


2、用OneStep™Kit处理后,从含有腐植酸的DNA中扩增200bp的产物。在“未处理”样品的情况下,PCR扩增完全被抑制。
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实验结果表明,OneStep™Kit可有效去除PCR抑制剂,使后续实验有效进行。

3、应用于NGS核酸样本处理
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4、回收率对比
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用OneStep™PCR抑制剂去除试剂盒与竞品的试剂盒进行样本处理。使用MN厂家或Q厂家测量较低浓度的DNA浓度,并计算每个试剂盒的回收率%。

问题四:Zymo Research的D6031一步法PCR抑制物去除试剂盒和其他相同类型的产品有什么不同?对比优势在哪里?

1、该试剂盒操作时间小于5min,可用于DNA/RNA的纯化回收,DNA/RNA回收率大于80%,最大处理样本量200μl,不限制核酸投入量及纯化回收的核酸片段大小,洗脱体积可根据客户自身需求进行调整,无最小洗脱体积限制。
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2、与厂商MN和厂商Q同类型产品相比,zymo PCR抑制物去除试剂盒可最大减少操作步骤,同类型竞品完成整个流程需要约7-9步操作,而 zymoPCR抑制物去除试剂盒只需将回收柱底部掰断后,将样本加入至回收柱后离心即可,最大程度减少客户造作节约时间成本。
【zymo流程】

【zymo流程】
【厂商MN流程】
【厂商MN流程】
【厂商Q流程】
【厂商Q流程】

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